In questa relazione di laboratorio vedremo come si esegue la determinazione dei nitriti nei vegetali a foglia larga.

1. Scopo della determinazione

Lo scopo dell’esperienza è quello di verificare se un campione di vegetali a foglia larga contiene una quantità di ione nitrito superiore al valore normalmente riscontrato in natura di 6 mg/Kg per le bietole, 2,7 mg/Kg per spinaci e < 1 mg/Kg per gli altri vegetali

2. Principio del metodo

Dopo aver estratto lo ione nitrito a caldo con acqua in un mortaio, si dosa la quantità col reattivo di GRIESS. A pH 2,0-2,5 la solfanilammide viene di azotata dall’acido nitroso ed il diazocomposto che ne risulta viene copulato con la n-(1-naftil)-etilendiammina; si ottiene così un azocomposto di colore rosso porpora la cui assorbenza viene misurata a 520 nm.

Le reazioni sono le seguenti:

3. Materiale e strumentazione

• Provette da centrifuga
• Cilindro da 100 mL
• Vetrino d’orologio
• Matracci tarati da 100 mL
• Mortaio e pestello
• Pipetta graduata e pipetta di pasteur
• Spettrofotometro che consenta letture a 520 nm.
• Cuvette di quarzo o in plastica dello spessore di 1 cm.

4. Reattivi

• Soluzione madre di NO₂^- 1000 mg/L. Pesare esattamente 0,185 g di KNO₂ e scioglierli in 100 ml di acqua deionizzata.
• Reattivo di GRIESS
• Soluzione di lavoro di NO₂^- 10 mg/L. Diluire 1 ml di soluzione madre di NO₂^- 1000 mg/L a 100 ml con acqua deionizzata.

5. Costruzione della retta di taratura

In 5 provette da laboratorio dispensare i seguenti volumi di soluzione di lavoro di NO₂^- 10 mg/L e addizionare i relativi volumi di acqua deionizzata. La concentrazione delle soluzioni cosi preparate è indicata nella tabella a seguire:

 Aggiungere a ciascuna delle soluzione precedentemente preparate 250 microlitri di reattivo di GRIESS ed attendere la comparsa della colorazione rosa per 20 minuti

Trascorso il tempo stabilito, effettuare le letture spettrofotometriche alla lunghezza d’onda di 520 nm contro bianco dei reattivo. Annotare le ABS ottenute e costruire, mediante modello di regressione lineare, la miglior retta passante per i 5 punti di taratura (best fit lineare).

6. Procedimento

A 10 g di campione si aggiungono 2,5 ml di acqua calda e si pesta il campione in un mortaio. Si prelevano i 2,5 ml di acque di vegetazione e si centrifugano. Dalla soluzione centrifugata si preleva 1 ml con una pipetta graduata e di addiziona di altri 9 ml di acqua deionizzata. Dopo aver agitato si addizionano 250 microlitri di reattivo di GRIESS.

Contestualmente preparare un bianco del campione formato da 1 ml di soluzione centrifugata e 9 ml di acqua deionizzata, senza però aggiungere il reattivo.

Attendere la comparsa della colorazione rosa per 20 minuti ed effettuare la lettura spettrofotometrica alla lunghezza d’onda di 520 nm contro bianco. Annotare la ABS ottenuta.

7. Espressione dei risultati

Il risultato viene espresso in mg/Kg di ione  NO₂^-.

8. Dati ottenuti e calcoli

Dalla costruzione della retta di taratura ho ottenuto i seguenti dati:

L’analisi del campione di spinaci ha prodotto un ABS (y) = 0,133

Dall’equazione delle retta ricavo un valore di concentrazione (x) per il campione di:

y = 0,387 * x + 0,007

x = ( y – 0,007 ) / 0,387

x = (0,113 – 0,007) / 0,387 = 0,32 mg/L di NO2-

Questo valore rappresenta la concentrazione della soluzione ottenuta diluendo 1 ml di estratto a 10 ml. Quindi moltiplico per il fattore di diluizione 10 ed ottengo:

Conc. NO₂^- nella soluzione estratta = 0,32 * 10 = 3,2 mg/L (o µg/ mL)

I µg di NO₂^- nel 2,5 ml di soluzione estratta saranno:

µg in 2,5 ml = 3,2 µg/ mL * 2,5 ml = 8,93 µg

Questa quantità è dunque lo ione NO₂^- presente in tutti i 10 g di campione analizzato:

Conc. µg/g di NO₂^- = 8,93 µg / 10 g = 0,89 µg/g (o mg/Kg)

9.Conclusioni

Il campione di spinaci preso in esame ha una concentrazione di 0,89 mg/Kg di NO₂^- mentre in natura ne dovrebbe contenere circa 2,7 ppm. Questo risultato anomalo và ricercato probabilmente in un estrazione non eseguita in modo opportuno dall’operatore.